Der HotShot ist das Ass in der Geschichte von SEQLAB. Obwohl die Fluoreszenz-Farbstoff-basierte Sequenzierung im Prinzip seit Anfang der 90er Jahre zur Verfügung steht und auch Auftragssequenzierer sich dieser Technik bedienen, blieben die Preise für diese Dienstleistung hoch, so dass nach wie vor in den kleinen Laboren und Universitätsinstituten viel in Eigenarbeit sequenziert wurde. Meist geschah dies unter Einsatz radioaktiver Methoden und lieferte dann nach zwei arbeitsintensiven Tagen bescheidene 250 Basen Information.

 

Es war der HotShot von SEQLAB, der 1999 das Signal zur Wende gab: Primer und zu sequenzierende DNA mussten vorgemischt eingeschickt werden. Dies ermöglichte uns, die gesparte Arbeit als Preisvorteil zurückzugeben, so dass sich institutseigenes Sequenzieren viel weniger lohnte. Da wegen der speziellen Vorgaben ein Wiederholen des Cycle Sequencings (CS) nicht möglich war, musste ein geeignetes CS-Protokoll entwickelt werden, um praktisch alle DNAs, auch solche mit einfachen Sekundärstrukturen, schon beim ersten Anlauf erfolgreich sequenzieren zu können.

 

Seit Januar 2000 steht dieses Protokoll zur Verfügung und liefert konstant beste Ergebnisse. Bei sauberen DNAs ohne überharte Sekundärstrukturen liefert der HotShot im 24-h-Service bei etwa 97% aller Proben gute Ergebnisse mit 99%iger Lesegenauigkeit.

 

Was wir brauchen:

 

Für die HotShot bzw. extendedHotShot-Sequenzierungsreaktion von Plasmiden pipettieren Sie bitte 600-700 ng Plasmid und 20 pmol Primer in ein 0,2-ml-Reaktionsgefäß mit flachem Deckel und füllen Sie dieses auf 7 µl auf. Günstig ist zudem  5-10 mMol Tris in der Probe.

Für die HotShot- bzw. extended HotShot Sequenzierungsreaktion von PCR-Produkten schicken Sie  uns bitte: PCR-Produkt-Länge geteilt durch 4 ergibt die Menge an benötigter DNA in Nanogramm. Dazu geben Sie 20 pmol Primer  in einem 0,2-ml-Reaktionsgefäß mit flachem Deckel, das auf 7 µl aufgefüllt werden muss. Günstig ist zudem  5-10 mMol Tris in der Probe.

Bitte nummerieren Sie HotShot-Proben nur nummerisch durchlaufend (z.B. 1 bis 5 oder 10 bis 15). Die Beschriftung sollte auf dem flachen Deckel des Reaktionsgefäßes vorgenommen werden (auf Wischfestigkeit achten, keine Aufkleber und 8er-Stripes verwenden).

Bitte schicken Sie Ihre Proben umverpackt (z.B. in einem Plastikreagenzröhrchen) in einem wattierten Umschlag, um Beschädigungen auf dem Postweg auszuschließen.

Beachten Sie bitte auch unsere PDF-Broschüre unter: "INFOS und TIPPS"